Köpeklerde Canine Distemper Virus Enfeksiyonunun Araştırılması Virusa Karşı Monoklonal Antikor Üretimi ve Antijen ELISA Geliştirilmesi

Yükseköğretim Kurumları Destekli Proje, 2022 - 2024

Proje Türü: Yükseköğretim Kurumları Destekli Proje
Başlama Tarihi: Ağustos 2022
Bitiş Tarihi: Ağustos 2024

Proje Özeti

Köpek Gençlik Hastalığı, bulaşıcı ve direkt tedavisi olmayan bir hastalık olup etken Canine Distemper Virus (CDV)’tur. CDV, Paramyxoviridae ailesinde, Morbillivirus genusundadır. CDV ile enfekte olmuş köpekler sindirim, solunum ve gastrointestinal klinik bulgular gösterir. Köpek Gençlik Hastalığı için potansiyel kaynak olarak Türkiye’de ortalama 1.220.000 sahipli köpek bulunmaktadır, Avrupa da bu sayı 89 milyonu aşmaktadır. Hastalığın erken teşhisi önemli olduğu için teşhis kitlerinin ülkemizde üretilmesi hem hayvan sağlığı hem de ülke ekonomisi açısından büyük önem arz etmektedir. Bu Doktora Tez projesinde köpeklerde CDV enfeksiyonunun araştırılması ve izolasyonu, virusa karşı monoklonal antikor üretimi ve antijen-ELISA geliştirilmesi amaçlanmıştır.
Bu projede Köpeklerde CDV enfeksiyonunun tespiti için hücre kültürü izolasyon ve RT-PCR teknikleri kullanılacaktır. Bu amaçla Kayseri ilindeki özel Veteriner klinikleri ve Erciyes Üniversitesi Veteriner Fakültesi Eğitim Araştırma ve Uygulama Hastanesi kliniklerine getirilen Köpek Gençlik Hastalığı şüpheli köpeklerden göz yaşı, dışkı ve lökosit kan örneklemeleri yapılacaktır. Virus izolasyon çalışması için inokulum haline getirilen örnekler Vero hücre kültürüne adsorbsiyonlu yöntemle ekilecek ve kör pasajlarla CPE yönünden doku kültürü mikroskobunda takip edilecektir. Örneklerin RT-PCR (Revers Transkriptaz Polymerase Chain Reaction, Ters Transkriptas Polimeraz Zincir Reaksiyonu) testi ile identifikasyonu; CDV N genine (Nükleoprotein geni) spesifik primer setleri kullanılarak gerçekleştirilecektir.
Antijen-ELISA geliştirilmesinde RT-PCR ve hücre kültürü CPE (sitopatik etki) pozitif çıkan CDV izolatlarından yararlanılacaktır. Bu amaçla ilk olarak hibridoma teknolojisi ile; immunize edilen fare dalak hücre-myeloma hücre füzyonundan elde edilen hibridomalardan Anti-CDV fare monoklonal antikorlarının üretimi, saflaştırılması ve karakterizasyonu gerçekleştirilecektir. Yine testte kullanılmak üzere Anti-CDV tavşan poliklonal antikorları üretilecektir. Projenin son aşamasında; Antijen-ELISA test kurulumu yapılarak üretilen monoklonal antikorların en az %95 güven aralığının hedeflendiği Spesifite (Özgüllük) ve Sensitivite (Duyarlılık) değerlendirmeleri yapılacaktır.