Ovaryum dokusunda pannexin 1 ekspresyonunun karakterizasyonu ve in vitro oosit maturasyonundaki rolü
EMK 2025 27. ULUSAL ELEKTRON MİKROSKOPİ KONGRESİ, İstanbul, Türkiye, 25 - 27 Eylül 2025, ss.158-159, (Özet Bildiri)
- Yayın Türü: Bildiri / Özet Bildiri
- Basıldığı Şehir: İstanbul
- Basıldığı Ülke: Türkiye
- Sayfa Sayıları: ss.158-159
- Yozgat Bozok Üniversitesi Adresli: Evet
Özet
AMAÇ: Hücre-hücre ve hücreden matrise iletişim, ovaryum folikül gelişimi ve oosit olgunlaşmasında çok önemli bir rol oynamaktadır. Bu iletişimin önemli bir yönü muhtemelen Konneksin (Conx) ve Panneksin (Panx) ailelerine ait büyük gözenek oluşturan kanallar tarafından kolaylaştırılmaktadır. Panx ailesinin bir üyesi olan Panx1, folikül gelişim yetersizliği ve oosit sağkalım eksiklikleri ile ilişkilendirilmiştir (1). Bu nedenle, bu çalışmada fare ovaryumunda gelişen foliküllerin her bir bileşeninde ve in vitro maturasyon sürecindeki oositlerde Panx1'in lokalizasyonunu ve yoğunluğunu araştırmak amaçlanmıştır. Ayrıca, in vitro olgunlaşma sırasında immünofloresan, Western blot ve qRT-PCR yöntemleri kullanılarak özellikle GV (germinal vezikül), MI (metafaz I) ve MII (metafaz II) oositlerinde Panx1'in lokalizasyon modelinin ortaya çıkarılması ve miktarının analiz edilmesi hedeflenmiştir.
GEREÇ VE YÖNTEM: Çalışma grupları: 90 adet 4-5 haftalık dişi Balb/C türü farelerden; ovaryum inceleme grubu ve oosit inceleme grubu olmak üzere 2 gruptan oluşturulmuştur. Ovaryum inceleme için (n=15) ovaryumun farklı aşamadaki folikülleri; hem folikül hücreleri hem de içerdikleri oositlerde Panx1’in lokalize olduğu bölgeler ve yoğunluğu immünfloresan yöntemle görüntülenerek hesaplanmıştır. Oosit inceleme grubu (n=75); in vitro oosit maturasyon değerlendirme için (GV, MI ve MII oositler) ve in vivo MII oositler aynı şekilde immünfloresan yöntemle işaretlenerek Panx1’in lokalize olduğu bölgeler ve yoğunluğu görüntülenerek hesaplanmıştır. Ayrıca protein ve mRNA düzeyinde Panx1 ekpresyonu in vitro GV, MI ve MII oositlerde Western Blot ve qRT-PCR ile gösterilmiştir.
BULGULAR VE SONUÇ: Çalışmamızda, ovaryum folikül hücreleri ve folikül oositlerindeki Panx1 ekspresyon yoğunluğu arasında önemli bir fark gözlenmemiştir. Bununla birlikte, in vitro maturasyon sürecindeki oositlerde kümülüs içeren ve kümülüs içermeyen GV oositler değerlendirilmiş ve Panx1 sinyal yoğunluğu kümülüssüz GV oositlerinde daha yüksekken, kümülüsle çevrili GV oositlerinde nispeten daha düşük (p = 0.021) bulunmuştur (Şekil 1). İlginç bir şekilde, Panx1 sinyal yoğunluğu in vitro olgunlaşma sırasında GV aşamasından MII aşamasına önemli ölçüde azalmıştır (p < 0,05). Western blot analizi, in vitro ortamda GV, MI ve MII aşamasındaki oositler arasında Panx1 protein seviyelerinde önemli bir fark olmadığını göstermiştir. Bununla birlikte, Panx1 mRNA seviyeleri, oositler GV aşamasından MII aşamasına ilerledikçe önemli bir şekilde artmıştır (p = 0.018).
TARTIŞMA: Fare ovaryum dokusunda ve in vitro oositlerinde Panx1 ekspresyonunun varlığı gerek protein gerekse mRNA düzeyinde gösterilmiştir. Bu çalışma ile ovaryum folikül gelişimi ve oosit maturasyonunda belli aşamalarda Panx1’in eskpresyonunun artmasının/azalmasının bir nedeninin olabileceğini göstermektedir. Altta yatan mekanizmaları aydınlatmak ve Panx1 kanalı ile diğer üyelerinin olası rollerini keşfetmek için daha fazla moleküler düzeyde araştırma yapılması gerekmektedir.
KAYNAKÇA:
1. Q. Sang, V. Zhang, J. Shi, X. Sun, B. Li, Z. Yan, et al., “A pannexin 1 channelopathy causes human oocyte death”. Science Translational Medicine, 11 (2019): 1-12.